pod吸光值减小(吸光率和od值)
原标题:pod吸光值减小(吸光率和od值)
导读:
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Pod25pod的万象天引怎么用啊
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为什么过氧化氢在240nm的吸光度下不能调零
过氧化氢在240nm的吸光度下不能调零的原因主要是过氧化氢在该波长下有强烈的吸收特性。以下是具体分析:过氧化氢的光吸收特性:过氧化氢在240nm波长下具有强烈的吸收峰,这意味着在此波长下,过氧化氢会显著吸收光能,导致吸光度值较高。
在Cd2+胁迫下,植物体产生大量的活性氧自由基,导致细胞膜脂过氧化,生理代谢紊乱。同时,也引起活性氧清除系统的一些应激性变化,以清除过量自由基,保护植物体各项生理活动的正常进行。如植物体内的SOD、POD、CAT等抗氧化酶能在一定程度上清除活性氧自由基,降低细胞的受伤害程度。
过氧化氢酶活性测定方法众多,紫外吸收法因其操作简便,灵敏度高而被广泛应用。该方法基于过氧化氢酶能够分解过氧化氢,导致反应溶液在240nm波长下的吸光度下降,通过计算吸光度变化率来评估酶活性。紫外吸收法的核心在于酶的提取与测定。
在测定pod活性的时候,要求反应时间内吸光度的变化,为什么
1、测定过氧化物酶活性使用愈创木酚法,原理是在酶的催化下,H2O2aq与愈创木酚反应生成茶褐色产物。此产物在470nm波长下具有最大吸收值,通过紫外分光光度计测定吸光度,反推酶活性。实验每分钟读一次吸光度,因为酶促反应持续进行,产物生成导致吸光度变化。
2、过氧化物酶(POD)活性的测定过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,因此pod测定吸光值减小。
3、过氧化物酶催化H2O2氧化酚类物质,产生有色化合物。在愈创木酚法中,POD催化H2O2将愈创木酚氧化为红棕色的4-邻甲氧基苯酚,其470 nm处有高光吸收,因此可利用比色法测量其活性。实验所需材料包括各种果蔬,以及研磨设备、离心机、分光光度计等仪器,以及醋酸缓冲液、愈创木酚、H2O2等试剂。
4、pod酶活性测定方法有定时法、连续监测法、平衡法。定时法 通过测定酶反应开始后某一时间段内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。优点:简单易行,对试剂要求不高。
5、以1分钟内398nm吸光度上升0.01为一个酶活性单位,结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性测定POD活性测定采用愈创木酚法(Lurie等,1997)。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。